PRACTICA NO. 5

CONTEO DE LEUCOCITOS

OBJETIVO

Aprender a realizar y aplicar la metodología para un recuento de Leucocitos por milímetro cúbico de sangre e interpretar el resultado.

FUNDAMENTO

Para el conteo de leucocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales.
Todo método manual de recuento celular incluye 3 fases:
-Dilución de la sangre
-Muestreo de la sangre diluida en un volumen
-Recuento de células en ese volumen
Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que corresponden a los  campos 1, 3,7 y 9.
Para su dilución, se hace lo mismo que para los hematíes pero empleando la pipeta de blancos, de modo que la solución que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como diluyente el líquido de Turk. El líquido de Turk es hipotónico de modo que se destruyen los hematíes y así no entorpecen en el recuento.
El líquido de Turk consta de ácido acético glaciar 2ml, violeta de genciana disolución de 1% 1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deberá filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos.
En un principio es un poco difícil distinguir los leucocitos de los restos de membranas de los hematíes hemolizados. Se debe tener en cuenta que los leucocitos son más refringentes (más brillantes) al moverlo con el microscopio que los restos de hematíes. Se debe observar la presencia de la membrana citoplasmática y de la membrana nuclear (a veces más) como líneas finas y brillantes. Esto se observa fácilmente moviendo el microscopio hacia delante y hacia atrás

MATERIAL

Pipeta de Thoma para glóbulos blancos (perla blanca)
Equipo para venopuncion (Tubo lila)
Boquilla blanca
Tubo de goma
Tubos de ensayo
Papel parafilm
Cámara de Neubauer
Cubrehematimetro
Microscopio
Gasas

SUSTANCIAS

Alcohol al 70% 
Sangre venosa
Liquido de Turk

PROCEDIMIENTO

1.-Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA

2.-Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta

3.-Llenar la pipeta de glóbulos blancos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilución de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente

4.-Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido de Turk) y absorber hasta la marca 11, no deben quedar burbujas.

5.-Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos

6.-Montar la laminilla de vidrio en la cámara para recuento. Debe estar limpia y seca.

7.-Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente.

 8.-Dejar 3 minutos  que los leucocitos se sedimenten

9.-Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar  en los 4 cuadrados angulares.

10.-En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se consideran los que estén en los límites inferior y derecho.

OBSERVACIONES

Enfocando uno de los cuadros laterales, se aprecian claramente los 16 cuadros pequeños donde se tienen que contar los leucocitos que hay en ellos. Se debe de tener cuidado de no confundir los restos de eritrocitos hemolizados con los leucocitos, que deben de aparecer como puntos purpuras o negros.

 RESULTADOS

Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos,  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3

Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados angulares, se suman el total de ellos y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:
N° de leucocitos x mm3 = altura x dilución x área 
N° de leucocitos x mm3 = 1/10 x 1/20 x 4 = 1/10 000
N° de leucocitos x mm3 = 4/200 = 1/50
N° de leucocitos x mm3 = N° de leucocitos contados x 50
En el análisis hecho,  los resultados de la cuenta de células quedaron así por casilla:
El número de leucocitos fue de 120, al realiozar la operacion nos dimos cuenta qe estaba dentro del rango normal.

VALORES DE REFERENCIA
(Millones de células/mm3)
Hombres y Mujeres:………………………………..5 000-10 000

 CONCLUSIÓN

Los leucocitos son las células sanguíneas que dentro del organismo participan desarrollando diferentes funciones como son: fagocitosis, defensa inmunológica específica o inespecífica.
Existen dos grandes tipos de estos glóbulos:
Polimorfonucleares:
Basófilos
Eosinófilos
Neutrófilos
Mononucleares:
Linfocitos (células T y células B)
Monocitos
El recuento leucocitario representa el número de leucocitos en un litro  de sangre completa. La cuantificación o recuento de leucocitos es muy importante para el diagnóstico de enfermedades.
Un bajo número de glóbulos blancos se denomina leucopenia y puede deberse a:
Insuficiencia de la médula ósea (por ejemplo: debido a infección, tumor o cicatrización anormal).
Enfermedades vasculares del colágeno (como el lupus eritematoso sistémico).
Enfermedad del hígado o el bazo.
Radioterapia o exposición a la radiación.
Un alto número de glóbulos blancos se denomina leucocitosis y puede deberse a:
Anemia.
Tumores de la médula ósea.
Enfermedades infecciosas.
Enfermedad inflamatoria (como artritis reumatoide o alergia).
Leucemia.
Estrés emocional o físico intensos.
Daño tisular (por ejemplo, quemaduras).
Es muy importante comentarle al médico acerca de cualquier medicamento que se esté tomando, incluyendo productos de venta libre. Ciertos fármacos pueden interferir con los resultados del examen, como Sulfonamidas, Alopurinol, Ácido acetilsalicílico (aspirina), cloroformo, corticosteroides, epinefrina, heparina, quinina o triamtereno
La cámara de Neubauer o hemocitómetro es una lámina portaobjeto gruesa, en cuyo centro se hayan dos superficies cuadriculadas iguales, separadas del resto de la lámina por surcos y dos barras transversales algo más elevadas.

Una laminilla cubreobjetos ópticamente plan, que al colocarse sobre las barras elevadas de la lámina forma una cámara entre el cubreobjetos y la superficie cuadriculada, teniendo una altura de 0.1mm

En la cámara de Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y leucocitos son diferentes, como se muestra en la imagen.
Bibliografía:
Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos, articulo web consultado el día 8 de marzo de 2012 en: http://html.rincondelvago.com/fundamentos-y-tecnicas-de-analisis-hematologicos-y-citologicos.html
Conteo de glóbulos blancos, artículo consultado el día 16 de marzo en http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003643.htm
Martínez Fragoso, Vicente. Manual de Biometría Hemática. CBTis199, México, 2012. Pp. 22-24