DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA
Objetivo:Determinar cuántos gr de hemoglobina (Hb) hay en toda la sangre circulante, para tener un diagnostico clínico ya que se pueden variar diversas enfermedades debido a un valor anormal de Hemoglobina.
Fundamento:
La hemoglobina es una
proteína conjugada que sirve para el transporte de oxígeno y dióxido de
carbono. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr. De
hemoglobina capaces de transportar 800ml de oxígeno.
Una molécula de hemoglobina
consta de 2 pares de cadenas polipepticas (unión de aminoácidos) (globina) y 4
grupos proteicos HEM que contienen cada uno un átomo de fe en estado ferroso.
Cada punto HEM se localiza en una zona determinada de una de las cadenas de
polipepticos. Localizando cerca la superficie de la molécula, el HEM se combina
de forma reversible con una molécula de oxigeno y dióxido de carbono. Este
grupo HEM es el responsable del del color rojo de la hemoglobina (hb).
La parte proteica o globina
tiene 4 cadenas polipeptidicas que se denominan con las letras α, β, γ, δ.
Existe una cadena mas la ε que esta presente durante los 3 primeros meses de
vida se diferencian unas de las otras en el numero o posición (de los
aminoácidos de los que están compuestas). Por lo tanto existen varios tipos de
hb. en el ser humano se pueden encontrar las siguientes hemoglobinas normales:
Hemoglobina A: consat de 2
cadenas α y 2 cadenas β en un adulto normal corresponde a mas del 95% del
total.
Hemoglobina A´: consat de 2
cadenas α y 2 cadenas δ en un adulto sano esta en porción menor de 3%.
Hemoglobina F (fetal): consa
de 2 cadenas α y 2 cadenas γ. Es la hemoglobina principal en el feto desde el
4° mes del embarazo hasta aproximadamente los 6 meses de edad. La Hb F tiene
mayor afinaidad por el oxigeno.
Hemoglobina Gower: consa de
2 cadenas α y 2 cadenas ε. Desaparece casi por completo en el tercer mes de
embarazo y empieza a aparecer la Hb fetal.
Algunos datos se obtiene
exmainando a simple vista una muestra de sangre. Un aspecto normal del suero o
del plasma revela que el pigmento esta en los glóbulos rojos. Si se agita en
una sangre total normal en el aire durante 15 min. Adquere un color rojo claro
por convertir la Hb en oxihemoglobina.
La sangre tiene un color
rojo cereza brillante cuando el pigmento es carboxi-hemoglobina en la
intoxicación por CO. El color es chocolate en la metahemoglobulemia y la banda
malvada en alsulfohemoglobulemia.
Las distintas Hb tienen
espectros de absorción características a las que determina en un
espectofotometro. La identificación de difrenetes formas de la Hbcon la
determinación de sus espectros de absorción puede hacerse de una manera
sencilla
Material y
Equipo:Un colorímetro fotoeléctrico o un espectrofotómetro.
Una pipeta de vidrio graduada de 5 mL
Pipeta semiautomática
Tubos de ensayo.
Cubetas cuadradas.
Gradilla
Gasa
Reactivos:
EDTAReactivo Drabkin
Ferrocianuro de potasio
Cianuro de potasio
Bicarbonato de potasio
Solución estándar de cianometahemoglobina
Reactivos biológicos:
Sangre venosa con EDTA.
Técnica:
1.-En un tubo de 13 x 100
colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin, marcarlo como problema (P). 
2.-Obtener 5 ml de sangre
venosa con anticoagulante (EDTA).
3.- Mezclar perfectamente la
sangre problema, por inversión por lo menos 20 veces antes de tomar la muestra.
4.-Con una pipeta automática
o pipeta de Shali se toma exactamente 0,02 mL (20 µL) de sangre total, limpiar
luego la punta de la pipeta.
5.-La sangre tomada del tubo
con EDTA se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3
veces y se mezcla.
6.- Mezcle la solución de
Drabkin con la sangre por inversión y con mucha precaución
7.-Dejar en reposo por
espacio de 3 a 5 minutos. Para que se
efectúe la reacción.
8.-Después de ese tiempo se observara
una coloración roja transparente, se llena las cubetas hasta la marca que se
encuentra y se procede la lectura.
9.-Leer en absorbancia con
filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotómetro con agua destilada /
Drabkin.
Antes de hacer la medición
con el espectrofotómetro hacer el siguiente procedimiento
PARA HACER LA
MEDICION DE TRANSMITANCIA HACER EL SIGUIENTE PROCEDIMIENTO:
Medición de Transmitancia:
1.- Encender el
Espectrofotómetro 30 minutos antes, después
seleccione la longitud de onda deseada (540 nm para Hb) con las teclas
numéricas y oprima <GO TO>.
Aparecerá en la pantalla el valor numérico.
2.-Presine < %T> para
Transmitancia.
Aparecerá en la pantalla “T”.
3.-Insertemla cubeta con el
blanco en el portacubeta, cierre la puerta y oprima <SECOND FUNCTION> Y
<100 %>. Aparecerá En la pantalla 100.0 T.
4.-Remueva el blanco e
inserte la muestra problema contenida en la celda y cierre la puerta.
Aparecerá en la pantalla el valor en
Transmitancia.
5.-Si desea imprimir, oprima
<PRINT> para avance de papel y/o una segunda vez para la impresión en el
papel del espectrofotómetro o <SECND REMOTE> para mandar a un dispositivo externo (a la computadora).
6.-Retire la cubeta del
compartimiento y cierre la puerta (lave la cubeta y guárdela).
8.-Si no va usar más el
aparato, apáguelo y cúbralo, si desea continuar trabajando, elija el modo de
trabajo siguiente y continúe.
Resultado:
Este fue el resultado que
nos salió en el espectrofotómetro.
Cálculos:
.461/.472 x 15 = 14.65
Rango:
Normal ya que era la muestra
de una mujer
Cálculos:
Hb total = concentración de
Hb (gr/ml) x volumen sanguíneo (ml).
En espectofotometro se
aplica la siguiente formula:
Muestra/ estandar x 15 = Hb
Valores de
referencia:
Niños al nacer……………………………..
13,6 - 19,6 g/dL
Niños de 1
año…………………………..... 11,3 - 13,0 g/dL
Niños de 10 -12
años……………………... 11,5 - 14,8 g/dL
Mujeres……………………………………...
11,5 - 16,5 g/dL
Hombres……………………………………. 14,0
- 18,0 g/dl.
Observaciones:
Al hacer la práctica notamos
que para determinar este volumen que existe de Hb circulante en la sangre es
fácil y sencillo de sacar ya que a la hora de meterlo al espectrofotómetro
prácticamente nos dice todo solo hay que sacar el resultado haciendo la
operación básica que ya nombramos anteriormente.
Los exámenes de laboratorio
pueden realizarse por muchas razones, como investigación rutinaria de salud o
sospecha de enfermedad o de toxicidad. También pueden ser utilizados para
determinar si la efectividad de un medicamento mejora o empeora. Los exámenes
pueden medir el éxito o fracaso de un tratamiento. Pueden ser solicitados por
razones médicas o legales. Las siguientes son posibles razones por las que este
examen puede realizarse:
Acidosis láctica
Anemia de células
falciformes
Anemia por deficiencia de
hierro
Embolia grasa
Conclusiones:
Existen varios factores para
determinar cuándo y con qué frecuencia se pueden realizar los exámenes. Su
duración puede depender de los resultados o terminación de otros exámenes,
procedimientos o tratamientos. Los exámenes pueden ser realizados
inmediatamente en una emergencia o pueden ser demorados conforme una condición
es tratada o monitoreada. Se puede sugerir un examen o llegar a ser necesario
cuando aparecen ciertos signos o síntomas.
Debido a cambios de las
funciones naturales del organismo durante el día, los exámenes pueden ser
realizados en una determinada hora. Si usted se ha preparado para este examen
con cambios en la ingesta de comida o líquidos, los exámenes pueden ser
realizados de acuerdo con estos cambios. Los intervalos para la realización de
los exámenes pueden basarse en el aumento o disminución de los niveles de
medicamentos, drogas u otras sustancias en el organismo.
Bibliografía:
Hematología: fundamentos y
aplicaciones clínicas
Escrito por Bernadette F.
Rodak Pag. 171.
Laboratorio de diagnóstico
clínico
Escrito por Díaz Martín,
Gustavo A.Pag. 395-396
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