domingo, 18 de septiembre de 2011

METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACION RITCHIE


METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACION RITCHIE

FUNDAMENTO:

Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.

Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para la evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

Solución salina isotónica.
Solución de formaldehido al 10% éter.
MATERIAL Y EQUIPO:


Centrifuga                                                Solución salina isotónica
Tubos de ensaye cónicos de 15 ml.        Solución de formaldehido al 10% éter.

Gasa cortada en cuadros

Embudos de polietileno

Vasos de precipitado de 50ml.

Aplicadores de madera

Pipetas Pasteur con bulbo

Portaobjetos de 26x76mm

Cubreobjetos de 22x22mm

Microscopio

METODO:

A)   Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1gr. De la materia fecal en el vaso de precipitado, se añaden 10ml de solución salina y se homogeniza.

B)   Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.
C)   Se centrifuga la suspensión durante 2 minutos a 2000 rpm.
D)   Se decanta el sobrante y se suspende el sedimento con solución salina centrifugando, decantando y re suspendiendo 2 veces más.
E)   Al último sedimento se le agrega 5ml de solución de formaldehido al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10minutos

F)   Se añaden después 0.5ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan energéticamente durante 30 segundos.
G)   Se centrifuga durante 2 min. A 2000 rpm.
H)   Después de centrifugar se observan 4 capas:
-éter en la superficial.
-un tapón de restos fecales.
-formaldehido,
-sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.
I)    Se decanta el sobrante
J)     Se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.
K)    Se le añade una gota de yodo lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se homogeniza, cubriéndolo con el mismo.
L)   Se observa al microscopio con objetivos de 10x y 40x.


CONCLUCIONES:
Se observo la muestra de materia fecal ya después de haber elaborado todo el proceso anterior se observaron quistes y residuos de alimentos como tejido conectivo, fibras, etc.

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